需要自備的器材：  
1．PCR檢測試劑盒儀器：分析天平、離心機、熒光PCR擴增儀、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2μL、20  
μL、200μL、1000μL）。  
2．耗材：熒光PCR反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5mL經(jīng)焦碳二謠（DEPC）水  
處理的滅菌離心管、吸頭（10μL、200μL、1000μL）、滅菌雙蒸水。  
相對定量分析方法：  
2-ΔΔCt  
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)  
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：  
ΔCT（test）=CT（target,test）-CT（ref,test）  
ΔCT（calibrator）=CT（target,calibrator）-CT（ref,calibrator）  
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：  
ΔΔCT=ΔCT（test）-ΔCT（calibrator）  
3、計算表達水平比率：  
2–ΔΔCT=表達量的比值  
使用方法:  
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）  
1.注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染原，本產(chǎn)品不提供樣品做陽性對照，只提供可以鐘使用的DNA段作為陽性對照。  
2.標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。  
3.用帶芯頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯頭，下同）。  
4.在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。  
5.換頭，在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。  
6.換頭，在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。  
7.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。  
具有下列特點：  
1.根據(jù)指標(biāo)的保守序列設(shè)計的專一性引物，余關(guān)無交叉反應(yīng)。  
2.靈敏度比常規(guī)PCR高2-3個數(shù)量級，可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。  
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。  
4.一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。  
5.本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。  
6.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨診斷。  
注意事項：  
1.建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。  
2.試劑BufferAL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀，混勻后再使用。  
3.電泳檢測時，切勿使用含有SDS的LoadingBuffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結(jié)果。  
4.建議擴增片段長度1kb以內(nèi)，以便擴增效率佳。  
5.為了您的**和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。  
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