檢測認證人脈交流通訊錄
- 僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。 人腫瘤壞死因子α（TNF-α）定量檢測試劑盒（ELISA）說明書 【產品名稱】 通用名稱：人腫瘤壞死因子α（TNF-α）定量檢測試劑盒（ELISA） 英文名稱：Human Tumor necrosis factor-α（TNF-α）ELISA KIT 【包裝規格】 48人份/盒，96人份/盒 【預期用途】 僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人腫瘤壞死因子α（TNF-α）的濃度。 【檢驗原理】 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗人腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入人腫瘤壞死因子α（TNF-α）校準品和待測樣本，再加入另一株HRP標記的抗人腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體（酶標抗體），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產生藍色產物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中人腫瘤壞死因子α（TNF-α）的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中人腫瘤壞死因子α（TNF-α）的濃度。 【主要組成成分】 主要成分 組分 數量 主要成分 校準品 0.5ml/管*6管 抗原配制的6個濃度標準品 包被微孔板 96T 預包被固相抗體 HRP標記抗體 6mL HRP標記的檢測抗體 底物液A 6mL 過氧化脲工作液 底物液B 6mL TMB工作液 20×濃縮洗滌液 30mL 含0.15%Tween20的PBS 說明書 1份 -- 自封袋 1個 -- 不干膠 2片 -- 校準品濃度依次為：800、400、200、100、50、0 pg/ml。校準品已經通過測試，結果表明HBs抗原陰性，HIV1、HIV2和HCV抗體陰性，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶標儀 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動洗板機 5、37℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml量筒 7、無粉一次性乳膠手套 8、質控品（可從藍圖生物科技產品研發系統中選擇） 【儲存條件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。 2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。 3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。 【適用儀器】 半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。 【樣本要求】 樣本類型和采集 以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。 1、細胞培養上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復凍融。 2、血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。 3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。 樣本保存和穩定性 樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。 【檢驗方法】 試劑準備 1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保充分復溫到室溫。 2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結晶產生，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。 3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內使用。 操作程序 1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。 2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。 5、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。 6、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。 8、如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。 10、所有孔加入終止液50μL，在酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）。 【檢驗結果的解釋】 檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數Logistic曲線擬合（4-pl），創建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。 如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數，才是樣品的最終濃度。 【檢驗方法的局限性】 1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。 2、在試劑盒標示的有效期內使用，過期產品不得使用。 3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。 4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。 5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。 6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果，檢測前，請排除該因素。 7、通過其他方法得到的檢測結果，與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。 【產品性能指標】 1、物理性能 試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。 2、劑量反應曲線線性 校準品劑量反應曲線相關系數r值，大于等于0.9900。 3、精密度 批內精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內精度評估。批內變異系數CV%小于10%。 批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系數CV%小于15%。 4、靈敏度 最低檢出劑量小于5.5pg/mL。 5、回收率 三組已知的高、中、低濃度樣品，進行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。 6、特異性 本試劑盒識別天然和重組人腫瘤壞死因子α（TNF-α），與結構類似物無交叉。 7、穩定性 2℃-8℃保存，有效期6個月。 售后電話：13559590085
