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北京金泉水科技有限公司

檢測認(rèn)證人脈交流通訊錄

呋喃西林檢測試劑盒

  • 這真不是您需要的產(chǎn)品？
  • 品　　牌：
  • 主要規(guī)格：
  • wi73897
  • 用　　途：
    • 一、概要 硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動(dòng)力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用，作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長的添加劑。但在長時(shí)間的實(shí)驗(yàn)研究過程中發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變，正因?yàn)槿绱瞬艑?dǎo)致此類藥物禁止在治療和飼料中使用 用來檢測呋喃西林代謝物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶聯(lián)免疫方法結(jié)合了色譜技術(shù)，采用SEM衍生物的特異性抗體，具有很高的精確度和靈敏度，較低的操作技術(shù)要求和短暫的檢測時(shí)間，檢測樣品量大等特點(diǎn)在檢測中很好的表現(xiàn)出來。 本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。二、試驗(yàn)原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被呋喃西林代謝物抗原，樣品殘留的呋喃西林代謝物和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭抗呋喃西林代謝物抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物呋喃西林代謝物呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中呋喃西林代謝物的含量。三、適用范圍可定性、定量檢測動(dòng)物組織（雞、豬），蜂蜜樣品中的呋喃西林代謝物的殘留量。四、交叉反應(yīng)率呋喃西林代謝物…………………………………… 100% 呋喃它酮代謝物…………………………………小于 0.1% 呋喃妥因代謝物 …………………………………小于 0.1% 呋喃唑酮代謝物………………………………………小于0.1% 五、使用單位需自備的設(shè)備及試劑設(shè)備： ┅┅微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm ┅┅振蕩器 ┅┅渦旋儀 ┅┅離心機(jī) ┅┅旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅聚苯乙烯離心管：10ml、50ml ┅┅微量移液器：單道 20ml～200ml、200ml～1000ml 多道 250ml 試劑： ┅┅乙酸乙酯(分析純) ┅┅正己烷(分析純) ┅┅甲醇(分析純) ┅┅濃鹽酸 ┅┅氫氧化鈉(分析純) ┅┅去離子水六、提供的材料與試劑組份名稱 96T裝量 48T裝量 備注酶標(biāo)板 96T 48T 其它各規(guī)格裝量按比例增加或減少，具體裝量以實(shí)物為準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)品×6瓶* 1ml/瓶 0.5ml/瓶 高濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ppb 1ml/瓶 0.5ml/瓶 呋喃西林代謝物抗試劑 6ml 3ml 呋喃西林代謝物酶標(biāo)物 6ml 3ml 底物液A液 6ml 3ml 底物液B液 6ml 3ml 終止液 6ml 3ml 濃縮洗滌液(10×) 40ml 20ml 呋喃西林代謝物濃縮樣品稀釋液(2×) 40ml 20ml 10×衍生化試劑 1ml/瓶 0.5ml/瓶 *注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb 七、溶液的配制配液1: 樣品稀釋液用去離子水將呋喃西林代謝物濃縮樣品稀釋液(2×)按1:1體積比進(jìn)行稀釋，即：1份呋喃西林代謝物濃縮樣品稀釋液(2×)+1份去離子水；用于提取樣品的稀釋，樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。配液2: 洗滌工作液用去離子水將濃縮洗滌液(10×)按1:9體積比進(jìn)行稀釋，即：1份濃縮洗滌液(10×)+9份去離子水；用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。配液3: 1×衍生化試劑 將10×衍生化試劑用甲醇按1:9體積比進(jìn)行稀釋，即：1份10×衍生化試劑+9份甲醇，現(xiàn)配現(xiàn)用。配液4: 0.1M鹽酸溶液 量取860ml/濃鹽酸加入到盛有去離子水的容器中定容至100ml。配液5: 0.1M 氫氧化鈉溶液 稱取0.4g氫氧化鈉加去離子水溶解定容至100ml。八、樣品前處理步驟樣品處理前須知：（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否潔凈，必須使用潔凈實(shí)驗(yàn)器具，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（c）未處理的樣品冷凍保存。（d）處理后的樣品可在2-8℃避光保存24h。肌肉、肝臟、蜂蜜組織前處理方法 ┅┅用均質(zhì)器均質(zhì)樣品； ┅┅稱取1.0±0.05g均質(zhì)后的樣品, 分別加入4ml 0.1M 鹽酸溶液和100ml 1×衍生化試劑，用振蕩器充分振蕩2min； ┅┅在37 oC過夜孵育（大約16h）； ┅┅分別加入4ml 0.1M 氫氧化鈉溶液和10ml乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s； ┅┅3000g以上，室溫（20～25℃/68-77℉）離心5min； ┅┅取5ml乙酸乙酯相于50～60℃氮?dú)饬飨麓蹈桑?┅┅加入1ml樣品稀釋液和1ml正己烷，用渦旋儀渦動(dòng)30s ，充分混勻； ┅┅3000g以上，室溫（20～25℃/68-77℉）離心5min； ┅┅除去上層有機(jī)相，取下層水相50µl用于分析。九、檢測步驟測定前應(yīng)須知： 1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。 2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。 3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。 4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。操作步驟： 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。 4、編號：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。 5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50ml/孔到對應(yīng)的微孔中，再加入呋喃西林代謝物酶標(biāo)物50ml/孔，再加入呋喃西林代謝物抗試劑50ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250ml/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。 7、顯色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。 8、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。十、 結(jié)果判定結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，而定量判定用第2種方法。注意樣品吸光值與其所含呋喃西林代謝物成負(fù)相關(guān)。 1、用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.569，樣品2的吸光度值為1.725，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.523；0.05ppb為2.217；0.15ppb為1.566；0.45ppb為0.842；1.35ppb為0.387；4.05ppb為0.145。則樣品1的濃度范圍是0.45ppb～1.35ppb；樣品2的濃度范圍是0.05ppb～0.15ppb，再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中呋喃西林代謝物的濃度范圍。 2、定量分析（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 B—標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液的平均吸光度值 B0—0(ppb)標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光度值（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以呋喃西林代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣品的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲呋喃西林樣品所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣品中呋喃西林代謝物實(shí)際殘留量。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。 樣品的稀釋倍數(shù)：肌肉、肝臟組織、蜂蜜樣品稀釋倍數(shù)：2 十一、檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度試劑盒靈敏度：0.05ppb 檢測限：組織、蜂蜜…………………………………0.1ppb 回收率：水產(chǎn)、肌肉、肝臟、 蜂蜜 ………………………… 75±10% 精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10% 十二、注意事項(xiàng) 1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。 2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3、每加一種試劑前需將其搖勻。 4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。 5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。 6、儲(chǔ)存條件 保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 7、試劑變質(zhì)的跡象 發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。 8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時(shí)間到25min（或更長），但不得超過30min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。 9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。十三、貯藏條件及保存期 貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。 1盒96捆，最多可測90個(gè)樣本。

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