Roche LightCycler480 II熒光定量PCR儀是一款廣泛應用于基因表達分析、突變檢測、病原檢測等領域的設備。其主要結構和工作原理如下：
主要結構
1.光學系統：LightCycler480 II配備了高靈敏度的熒光檢測系統，包含多個激光光源和光電倍增管（PMT）。系統通過激光激發不同波長的熒光染料，結合濾光片選擇特定的波長范圍，從而檢測PCR反應中的熒光信號。
2.熱循環模塊：儀器內部具有精確的熱循環模塊，負責控制溫度的變化。該模塊能夠快速地升降溫度，確保每個PCR周期中的變性、退火和延伸步驟的高效完成。通常，LightCycler480 II使用的是Peltier熱電器件，以實現快速且均勻的溫控。
3.樣本管與多孔板：PCR反應液被裝載在96孔或384孔的PCR板中。LightCycler480 II具有高通量的樣本處理能力，可以同時處理大量樣本，減少分析時間。
4.計算機與軟件系統：儀器配備有強大的數據采集與分析軟件，如LightCycler 480軟件。它不僅負責監控實時PCR過程中的熒光數據，還能夠進行數據分析、結果報告生成及實驗設定等。
工作原理
1.熒光定量PCR：Roche LightCycler480 II的工作原理基于實時熒光定量PCR技術。與傳統的PCR相比，實時熒光PCR在每個擴增周期中實時監測熒光信號的變化。其通過熒光染料（如SYBR Green或TaqMan探針）結合到PCR產物中，隨著PCR反應的進行，產物逐漸增加，熒光信號也隨之增強。
2.熒光信號檢測：當熒光染料與PCR產物結合時，激光光源會激發熒光分子發射熒光，經過濾光片后，由光電倍增管（PMT）捕捉到熒光信號。這些信號被轉化為數字數據，表示各個時間點上PCR產物的數量。
3.數據分析：熒光信號的累積與PCR產物的擴增成正比。在反應的早期階段，熒光信號較弱，隨著擴增產物的積累，熒光信號會達到一個閾值（CT值）。通過監測該閾值的到達時間，儀器可以計算出初始模板的數量。
4.定量分析：通過與標準曲線對比，LightCycler480 II可以準確計算出樣本中靶基因的相對或絕對數量。因此，這種儀器廣泛應用于基因表達定量、病原檢測及突變分析等領域。
總的來說，Roche LightCycler480 II熒光定量PCR儀通過其精確的溫控系統、高效的熒光信號檢測系統和強大的數據分析功能，使得實時PCR技術得到了廣泛的應用，尤其在基因組學研究和分子生物學實驗中具有重要的作用。
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